預混合飼料中泛酸的測定,GB/T 18397-2014
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預混合飼料中泛酸的測定,通常采用高效液相色譜法(HPLC)進行。以下是測定過程中涉及的主要步驟、試劑、儀器和相關信息:
一、方法原理試樣中的泛酸經水提取后,使用磷酸緩沖液(pH 5.5)通過高效液相色譜C18柱進行分離。隨后,使用紫外檢測器在200nm處通過外標法進行定量測定。
二、試劑和材料磷酸緩沖液:通過稱取3.12g二水磷酸二氫鈉(NaH2PO4-2H2O)溶于1L水中,并用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調節至pH5.5,Zui后通過0.45um濾膜過濾脫氣備用。
泛酸(或泛酸鈣)標準溶液:包括標準儲備液和工作液。標準儲備液是通過準確稱取已知純度的D-泛酸(或D-泛酸鈣)標準純品0.02g,置于100ml棕色容量瓶中,用0.1%磷酸溶液溶解、定容至刻度并搖勻得到。標準工作液則是通過精密吸取標準儲備液用水按1:10比例稀釋得到,其濃度為每毫升含D-泛酸(或D一泛酸鈣)20ug。
其他試劑還包括0.1%磷酸溶液、1%乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)溶液、1mol/L氫氧化鈉溶液和1mol/L鹽酸溶液。
pH計
超聲波水浴
超純水裝置(如Millipore或全磨口玻璃蒸餾器)
離心機(3000 r/min)
液相色譜儀(如GE-200,配備8725i進樣器和UV紫外檢測器)
選取有代表性的預混合飼料樣品至少500g,通過四分法縮減至100g,然后磨碎并全部通過0.28mm孔篩。混勻后,裝入密閉容器中,避光低溫保存備用。
五、分析步驟準確稱取適量試樣(根據預混合飼料的種類和濃度確定,如復合預混合飼料稱取1-2g,維生素預混合飼料稱取0.25-0.5g)置于棕色容量瓶中。
加入適量水浸濕并搖勻,然后加入一定量的1%乙二胺四乙酸二鈉溶液混勻。
將混合液置于超聲波水浴上振蕩提取一定時間(如15min)。
用水定容至刻度并混合均勻,然后進行過濾或離心處理。
將處理后的溶液注入高效液相色譜儀中進行測定。
本方法適用于復合預混合飼料、維生素預混合飼料以及濃縮飼料中泛酸的測定,測量范圍為每千克樣品中含泛酸在50mg以上。
通過以上步驟,可以準確測定預混合飼料中泛酸的含量,為飼料質量控制和配方調整提供重要依據。
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